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一文与您分享基因扩增仪的正确使用方法
更新时间:2023-05-09   点击次数:1089次
  基因扩增仪被广泛应用于分子生物学领域,它可以把DNA序列进行扩增,让科学家更方便地从样本中提取出特定的DNA片段。本文将为你介绍基因扩增仪的使用方法,帮助你更好地掌握这一实验技术。
 

 

  1.准备工作
 
  在使用之前,需要先准备好耗材和实验器材。首先,检查PCR试剂盒是否完好无损、是否过期。其次,检查随机引物(primers)是否正确、完整。同样重要的是,准备好自己需要扩增的DNA模板,保证模板的质量和纯度。
 
  2.装载PCR反应体系
 
  裁切好所需长度的特定引物后,需要将引物与PCR试剂盒配制成反应液。按照试剂盒说明书的指导,在离心管中混合PCR混合液。通常情况下,一支PCR反应混合液可扩增20ulPCR反应液。
 
  3.安装PCR管到该仪器
 
  将装有PCR反应体系的管放入孔位。根据PCR引物的交联温度,设置好反应程序的温度体系。设定好反应程序后,按照仪器的说明书启动扩增程序。
 
  4.扩增反应
 
  通过基因扩增仪可控制反应的时间和温度,通常PCR反应具有3个阶段:变性、退火和延伸阶段。
 
  (1)变性:将DNA两股分离为单股。
 
  (2)退火:引物结合到模板上并结束。
 
  (3)延伸:在DNA聚合酶作用下延长引物序列并产生新的DNA片段。
 
  通常情况下,反应温度体系如下所示:
 
  1)变性:95℃,30秒。
 
  2)退火:恰当引物Tm-5℃~10℃。
 
  3)延伸:72℃,30秒/每kbp。
 
  4)重复扩增若干次,一般为20-30次。
 
  5.离心与收集产物
 
  反应液往往是浑浊的,需要离心以便去除沉淀。我们可以用凝胶电泳等方法检测扩增结果,并对针对性更强的目的进行后续的实验操作。
 
  以上就是使用基因扩增仪的步骤,希望这些内容能帮助您更好地完成实验任务。当然,在实践过程中还可能会遇到各种问题,需要耐心解决。
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